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文章分享|MIRA核酸快檢，助力男性Y染色體AZFc區(qū)域缺失早期診斷
近年來，男性不育問題逐漸受到廣泛關(guān)注，其中，Y染色體微缺失是導(dǎo)致男性不育的一個重要原因，尤其是Y染色體AZFc區(qū)域的缺失。由于此類缺失的早期癥狀不明顯，且傳統(tǒng)檢測方法需要高端設(shè)備和較長時間，很多基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)難以開展相關(guān)檢測，錯失了早期干預(yù)的時機(jī)。因此，如何開發(fā)一種簡單、快速且高效的檢測方法，成為解決這一問題的關(guān)鍵。 為了彌補(bǔ)這一空白，徐州婦幼保健院張燕團(tuán)隊(duì)基于MIRA技術(shù)平臺成功開發(fā)了兩種新的快速檢測方法，能夠有效、快捷地檢測男性Y染色體AZFc區(qū)域缺失。 研究設(shè)計與實(shí)驗(yàn)流程
樣本收集與分組 本研究從臨床中收集了男性不育患者的血樣或精液樣本。根據(jù)Y染色體上的SRY基因位點(diǎn)、sY254和sY255位點(diǎn)是否缺失，將樣本分為以下三組： 1.AZFc缺失組：確認(rèn)AZFc區(qū)域缺失的樣本。 2.AZFc非缺失組：未出現(xiàn)AZFc區(qū)域缺失的樣本。 3.陰性對照組：無任何Y染色體微缺失的正常男性樣本。 檢測位點(diǎn)選擇 本研究設(shè)計并應(yīng)用了以下兩種新型檢測方法： 三重實(shí)時熒光（RT-MIRA）方法：通過三重探針同時檢測sY254、sY255和SRY基因位點(diǎn)的熒光信號，利用實(shí)時熒光技術(shù)實(shí)現(xiàn)快速檢測。與傳統(tǒng)qPCR方法相比，RT-MIRA方法的操作更為簡便，檢測時間顯著縮短。 三重MIRA-LFD方法：MIRA結(jié)合三重層析試紙條（LFD），通過目視檢測層析條帶的顏色變化，快速判斷樣本是否存在Y染色體AZFc區(qū)域缺失。這種方法不僅能夠提供實(shí)時反饋，還能顯著降低對實(shí)驗(yàn)設(shè)備的依賴。 數(shù)據(jù)分析 為評估這兩種新方法的準(zhǔn)確性和可靠性，研究使用了Kappa一致性分析等統(tǒng)計學(xué)方法，與傳統(tǒng)的多重實(shí)時熒光定量PCR方法的結(jié)果進(jìn)行對比。通過分析檢測結(jié)果的一致性，進(jìn)一步驗(yàn)證新方法在臨床應(yīng)用中的可行性。 新方法的效果與優(yōu)勢
一 方法學(xué)評價 研究顯示，三重RT-MIRA和三重MIRA-LFD方法能夠在39℃的環(huán)境下，在短短15-20分鐘內(nèi)完成擴(kuò)增反應(yīng)，檢測限與傳統(tǒng)多重實(shí)時熒光定量PCR方法相當(dāng)。與傳統(tǒng)方法相比，新方法的反應(yīng)時間明顯縮短，且對實(shí)驗(yàn)環(huán)境的要求更低，操作也更加簡便。 二 臨床樣本檢測 在50例臨床樣本的檢測中，使用新方法的結(jié)果與傳統(tǒng)PCR方法完全一致。Kappa一致性分析結(jié)果顯示，新方法的檢測結(jié)果與傳統(tǒng)方法之間的相關(guān)性極高，表明新方法在準(zhǔn)確性和可靠性方面具有高度一致性。 三 特異性與靈敏度 經(jīng)過綜合評估，新方法在檢測Y染色體AZFc區(qū)域缺失方面，表現(xiàn)出了極高的特異性和靈敏度。即使在低濃度樣本中，新的檢測方法也能準(zhǔn)確檢測出AZFc缺失，極大地提高了早期診斷的準(zhǔn)確性。
優(yōu)勢一 高效快速 MIRA技術(shù)能夠在39℃的環(huán)境下，僅需15-20分鐘就完成整個檢測過程，顯著縮短了檢測時間。 優(yōu)勢二 操作簡便 MIRA技術(shù)不需要復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)操作和昂貴的設(shè)備，普通實(shí)驗(yàn)室即可進(jìn)行檢測。 優(yōu)勢三 低成本 相較于傳統(tǒng)PCR方法，MIRA技術(shù)整體解決方案的綜合投入成本低，適合基層醫(yī)院和POCT環(huán)境使用。 優(yōu)勢四 環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng) MIRA技術(shù)對實(shí)驗(yàn)環(huán)境的要求較低，能夠在資源有限的環(huán)境中快速、準(zhǔn)確地完成檢測。 通過三重RT-MIRA和三重MIRA-LFD這兩種新方法的早期檢測，可以為男性不育患者提供及時的診斷，進(jìn)而為他們制定科學(xué)的生育計劃，幫助其提高生育率。特別是對有家族歷史或長期不育癥狀的男性，提前發(fā)現(xiàn)Y染色體微缺失，為患者提供早期干預(yù)措施，能夠有效降低不育風(fēng)險。
安普未來多酶恒溫快速核酸擴(kuò)增技術(shù)MIRA技術(shù)在恒溫39°C-42°C下核酸擴(kuò)增，反應(yīng)時間僅為5-20 min。此外，不需要嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室條件，應(yīng)用場景多元化：綜合醫(yī)院檢驗(yàn)科、基層醫(yī)療、居家檢測、田間地頭等。 試劑產(chǎn)品形態(tài)多樣化：凍干粉、凍干微球等；顯示結(jié)果的多樣性：凝膠電泳、熒光曲線、膠體金試紙條等。試劑性能穩(wěn)定、便于操作、方便存儲運(yùn)輸。 并以MIRA為核心平臺技術(shù)研發(fā)出“超快速核酸釋放技術(shù)”、“雙通道恒溫?zé)晒鈾z測儀”、“一體化全自動封閉檢測系統(tǒng)”、“自測型核酸檢測裝置”等一系列配套產(chǎn)品，打造快速分子檢測整體解決方案。 |
