《Hybrid paper/PDMS microfluidic device integrated with RNA extraction and recombinase polymerase amplification for detection of norovirus in foods》

期刊名稱：《Applied and Environmental Microbiology》

影響因子：3.9

研究團(tuán)隊(duì)：麥吉爾大學(xué)戴維斯夫人研究所病毒性疾病中心

諾如病毒（(HuNoV)）屬于杯狀病毒科，可通過受污染的食物傳播，是引起急性胃腸炎的主要原因。

實(shí)驗(yàn)方法

纖維素紙條吸收了MNV-1 RNA，隨后將其釋放到MIRA試劑中，RNA首先被逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA（cDNA），然后擴(kuò)增成雙鏈DNA（dsDNA），接著探針與目標(biāo)序列進(jìn)行了特異性的結(jié)合，堿性四氫呋喃（THF）殘基被內(nèi)切酶IV裂解，使鏈被聚合酶延伸。擴(kuò)增子被捕獲，在T線上產(chǎn)生視覺信號。

實(shí)驗(yàn)開發(fā)成果

課題組開發(fā)了一種折疊的紙/PDMS微流控裝置，該裝置結(jié)合了核酸提取、等溫核酸擴(kuò)增、可視化檢測多種功能，可以無縫集成從樣品制備到MNV-1的終點(diǎn)檢測。

該微流控裝置在35 min范圍內(nèi)完成檢測，檢測限均為200 PFU/mL。并且每個微流控設(shè)備的成本計(jì)算為6.76美元，為課題組目前已知的所有檢測方法中最便宜的。

實(shí)驗(yàn)價值

課題組進(jìn)一步評估了這種微流控裝置在萵苣和覆盆子中檢測MNV-1的性能，將粗MNV-1 RNA提取物引入新鮮農(nóng)產(chǎn)品樣品中，不需要復(fù)雜的病毒RNA濃度和純化步驟，在生菜中檢測到170 PFU/g、在樹莓中檢測到230 PFU/g。

而傳統(tǒng)的檢測食品中病毒的分子分析方法，如PCR和qPCR需要高純度的病毒顆粒，這使病毒從食品基質(zhì)中的洗脫、濃度和純化變得復(fù)雜。并且傳統(tǒng)方法需要復(fù)雜、笨重和昂貴的設(shè)備，不適合在資源有限的環(huán)境中使用。

該裝置在快速檢測食品供應(yīng)鏈中的HuNoV和其他食源性病毒方面具有重要價值。